EnglishisÍslenska

Member institutions

Search in


ThesisUniversity of Iceland>Verkfræði- og náttúruvísindasvið>Meistaraprófsritgerðir>

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1946/7050

Title

β-Glucan Transferases of Family GH17 from Proteobacteria

Published
November 2010
Abstracts
  • is

    Ensím sem tilheyra fjölskyldu GH17 í flokkunarkerfi sykrurofsensíma voru rannsökuð úr þremur tegundum baktería: Methylobacillus flagellatus KT, Rhodopseudomonas palustris og Bradyrhizobium japonicum. Nýlegar rannsóknir hafa sýnt fram á að slík ensím úr Proteobakteríum sýna transferasa virkni, þ.e. þau klippa β-glúkan fjölsykrur og skeyta bútum á enda þega-sykra með myndun nýrra 1,3 tengja eða mynda greinar með β1,4 eða β1,6 tengjum. Gen ensímanna voru klónuð og tjáð í E. coli. Ensímin voru tjáð sem MalE samruna protein, en eftir framleiðslu og hreinsun var MalE hlutinn klipptur af með sérvirkum Ulp1 proteasa. Ensímin voru skilgreind með tilliti til virkni þeirra á laminarin fásykrur. Myndefni voru skilgreind með tilliti til stærðar og tengjagerðar með fjölbreyttri aðferðafræði, TLC, Maldi-TOF, electrospray og NMR. Niðurstöður rannsóknanna leiddu í ljós að tvö þessara ensíma, úr Rhodopseudomonas palustris og Methylobacillus flagellatus KT mynda β(1-3) tengi og eru því lengingarensím. Ensímið úr Bradyrhizobium japonicum sýndi β(1-6) transferasa virkni og er því greinamyndunar-ensím (branching). Unnt var að sýna fram á að ensímið klippir fjölsykrur frá afoxandi enda (reducing end) fjölsykruhvarfefnanna, öfugt við þau bakteríuensím sem hingað til hafa verið rannsökuð. Sá eiginleiki ætti að gera ensíminu úr Bradyrhizobium japonicum kleift að búa til fásykruhringi úr β-glúkan fjölsykrum.

  • In this thesis three β-glycosyl transferases which belong to the glycosyl hydrolase family 17 (GH17) are described. The three enzymes studied were from the bacteria: Methylobacillus flagellatus KT, Rhodopseudomonas palustris and Bradyrhizobium japonicum. Recent studies have shown that such enzymes from Proteobacteria have transferase activity, i.e., they cut β-glucan saccharides and transfer a part to β-glucan acceptor molecules by forming a new β(1-3) linkage or by forming branches with β(1-4) or β(1-6) linkages. Genes encoding the enzymes were cloned in E. coli. The recombinant enzymes were produced as MalE fusion proteins. After production the Mal E domain was cut off with a specific Ulp1 protease. The enzymes were characterized regarding to their activity on laminarin substrates. Following technology was implemented to study the reaction products: TLC, Maldi-TOF, electrospray and NMR. The results showed that the enzymes from Rhodopseudomonas palustris and Methylobacillus flagellatus KT formed β(1-3) linkages and are therefore elongation enzymes. The enzyme from Bradyrhizobium japonicum showed a β(1-6) transferase activity and is therefore a branching enzyme. The results showed that the enzyme cuts from the reducing end of β-glucan chains, which is different from the enzymes previously described. This property should allow the enzyme from Bradyrhizobium japonicum to form cyclic oligosaccharides from β-glucan polysaccharides.

Issued Date
16/12/2010


Artifacts
Name[Sortable]Size[Sortable]Visibility[Sortable]Description[Sortable]Format
Beta-Glucan Transf... .pdf2.54MBOpen Complete Text PDF View/Open