EnglishisÍslenska

Member institutions

Search in


ThesisUniversity of Iceland>Heilbrigðisvísindasvið>Meistaraprófsritgerðir>

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1946/8233

Titles
  • Development of a LC-MS/MS Method for the Quantification of Cortisol and Cortisone

  • is

    Þróun á LC-MS/MS aðferð til magngreiningar á kortisóli og kortisóni

Published
June 2011
Abstracts
  • Cortisol is one of the most important hormones in the body. Deficiency or abundance of this hormone can cause serious effects. The enzyme 11βHSD2 is an important enzyme in the metabolism of the active hormone cortisol. 11βHSD2 converts the active hormone cortisol to the inactive hormone cortisone and thereby prevents localized over- or under-expression in the body tissue. This conversion is inhibited by glycyrrhetinic acid along with other chemicals which can induce hypertension, hypokalaemia and other diseases. When searching for the cause of decreased metabolism of cortisol it is important to be able to measure the activity of 11βHSD2. Studies have shown that measurement of the ratio between cortisol and cortisone can be used to evaluate the enzymes activity. The aim of this study was to develop a more specific high through-put method based on LC-MS/MS for simultaneous quantification of cortisol, cortisone and glycyrrhetinic acid.
    Quantification method for all analytes was optimized with a chemometric approach. ESI ionization source in positive ion-mode was used. D-optimal design was utilized in the experimental screening of parameters. CCF-design was utilized in the optimization of the method. SPE and protein precipitation were tested for the sample preparation of urine and plasma samples. Experimental screening indicated a quadratic system where collision energy and organic phase had the most effect on the responses for both cortisol and cortisone but glycyrrhetinic acid was eliminated from the model due to poor chromatography. The method was optimized on both HPLC-MS/MS and UPLC-MS/MS where the result in both cases was that collision energy had the most significant effect on the responses of all analytes.
    A short method validation was performed where LOQ was determined to be 5ng/ml. Recovery and matrix effect showed good results except for glycyrrhetinic acid which showed ion-enhancement. After excluding one defected sample, the accuracy and precision of cortisol and cortisone met the acceptance criteria.

  • is

    Kortisól er eitt mikilvægasta hormón líkamans og getur skortur eða ofgnótt þess haft alvarleg áhrif á líkamsstarfssemina. Ensímið 11βHSD2 gegnir mikilvægu hlutverki í niðurbroti virka hormónsins kortisól. Með niðurbroti kortisóls í hið óvirka hormón kortisón, varnar ensímið staðbundinni ofvirkni þess eða ofvirkni í vefjum líkamans. Ýmis efni eru þekkt fyrir að geta hindrað virkni 11βHSD2 eins og t.d. lakkríssýra, sem getur leitt til ofþrýstings, kalíumskorts eða annarra sjúkdóma. Þegar leitað er að orsakavaldi minnkaðs niðurbrots á kortisóli er mikilvægt að geta mælt virkni þessa ensíms, 11βHSD2. Rannsóknir hafa sýnt að mæling á hlutfalli útskilnaðar á fríu kortisóli og kortisóni kemst næst því að mæla virkni ensímsins. Markmið þessa rannsóknarverkefnis er að þróa sérhæfða og afkastamikla aðferð byggða á LC-MS/MS fyrir greiningu á kortisóli, kortisóni og lakkríssýru.
    Magngreiningaraðferð fyrir kortisól, kortisón og lakkríssýru var hámörkuð með chemometrics nálgun og var jákvæð rafúðunarjónun (ESI) notuð við þróun aðferðarinnar. D-optimal hönnun var notuð í skimun á marktækt mikilvægum breytum sem hafa áhrif á næmni kórtisóls og kortisóns. CCF-hönnun var notuð við hámörkun aðferðarinnar. Sýnameðhöndlunaraðferðirnar fastfasa súluskiljun (SPE) og próteinfelling voru þróaðar á þvag og plasma sýnum.
    Skimun gaf til kynna að kvaðratískt kerfi liggi að baki. Árekstrarorka og tegund lífræns leysis hafði mest áhrif á næmni kortisóls og kortisóns. Lakkríssýra var útilokuð úr líkaninu þar sem léleg litskiljun kom í veg fyrir að hægt væri að leggja mat á toppa. Hámörkun á bæði HPLC-MS/MS og UPLC-MS/MS þar sem árekstrarorka reyndist hafa mest áhrif á næmni kortisóls og kortisóns.
    Stutt gilding var framkvæmd þar sem kom í ljós að lægsti mælanlegi styrkur kortisóls og kortisóns var 5ng/ml. Endurheimt og matrixu áhrif fyrir kortisól og kortisón voru innan leyfilegra marka en lakkríssýra sýndi jónunar aukningu. Að undanskildu einu gölluðu sýni féll nákvæmni og áreiðanleiki aðferðarinnar innan leyfilegra marka fyrir kortisól og kortisón.

Issued Date
03/05/2011


Artifacts
Name[Sortable]Size[Sortable]Visibility[Sortable]Description[Sortable]Format
Meistaraverkefni-l... .pdf5.48MBLocked Complete Text PDF