ÍslenskaenEnglish

Aðilar að Skemmunni

Leit eftir:


LokaverkefniHáskóli Íslands>Heilbrigðisvísindasvið>Doktorsritgerðir>

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/16535

Titill
en

The interconnected KIT receptor and Microphthalmia associated transcription factor axis in melanoma

Skilað
September 2013
Útdrættir
  • en

    Melanoma is an aggressive disease that arises from deregulated signaling events in melanocytes. The KIT receptor tyrosine kinase and the Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) are two essential components that are required for the normal physiology of melanocyte development and function. Consequently, aberrant activities of these factors are involved in the development of melanoma. To better understand the molecular basis of disease development we studied the mechanisms that gatekeep and fine-tune the activity of both KIT and MITF.
    In this thesis we have identified novel KIT ligand-dependent signaling pathways that, through MITF, affect cell proliferation. Notably, we found that the specific KIT tyrosine phosphorylation sites Y721 (PI3 kinase binding site), Y568 and Y570 (SRC binding sites) affect phosphorylation status of the MITF protein. Using inhibitors against SRC, PI3K, AKT, MEK ERK and p38 during KIT activation, we identified that these signaling pathways are essential components in communicating signals between KIT and MITF.
    The activity of KIT is regulated by the tetrapeptide insert in the extracellular juxtamembrane domain of the receptor. By generating receptor mutants with different insert lengths, we showed that the length of this insert is critical for the fine tuning of receptor activation.
    Using mass spectrometry and phospho-site specific antibodies against MITF, we found and characterized several serine and tyrosine phosphorylation sites in the protein. More importantly, in stark contrast to previous results, we discovered that the S73 and S409 phosphorylation sites of MITF are neither dependent on KIT nor MAPK-ERK signaling. Furthermore, we show that the tyrosine phosphorylation sites of MITF are required for oncogenic KIT signaling and affect nuclear localization of MITF.
    The structural properties of MITF and the KIT receptor were also clarified. By solving the crystal structure of MITF we explain the restricted heterodimerization of MITF towards TFEB, TFEC and TFE3, the binding of M-box DNA sequence and the ability to produce interallelic complementation.
    In short, the detailing of KIT and MITF regulation has increased our understanding of key signaling processes that are important to understand the development of melanoma.

  • Sortuæxli eru krabbamein litfruma (melanocytes). Himnubundni viðtakinn KIT og umritunarþátturinn MITF (microphthalmia associated transcription factor) eru bæði nauðsynleg fyrir eðlilega þroskun og starfsemi litfruma. Prótein þessi koma líka við sögu í sortuæxlum. Því er mikilvægt að skilja betur hvernig prótein þessi starfa í litfrumum og sortuæxlum og boðleiðirnar milli þeirra.
    Í ritgerð þessari eru tengslin milli KIT og MITF skoðuð á ýmsan hátt. Þær KIT-háðu boðleiðir sem senda boð til MITF og hafa áhrif á frumufjölgun voru skoðaðar. Tyrósín amínósýrurnar Y721 (sem er bindiset fyrir PI3 kínasann), Y568 og Y570 (sem er SRC bindiset) í KIT hafa áhrif á fosfórun MITF próteinsins sem bendir til að KIT sendi boð til MITF. Notkun hindra gegn SRC, PI3K, MEK, ERK og p38 kínösunum benda til að allar þessar boðleiðir sendi boð frá KIT til MITF.
    Vegna valvirkar splæsingar er KIT próteinið framleitt í tveimur útgáfum, með og án fjögurra amínósýra í “extracellular juxtamembrane” svæði próteinsins. Með því að útbúa stökkbreyttar útgáfur af þessu svæði sýndum við að lengd svæðisins, frekar en röðin sjálf, er mikilvæg til að stilla af virkni KIT próteinsins.
    Massagreining var notuð til að greina þau set í MITF sem eru fosfærð. Fosfó-sérvirk MITF mótefni voru síðan útbúin til að staðfesta fosfæringarnar. Fjöldi nýrra fosfæringarseta fundust. Setin Ser73 og Ser409, sem áður hafa verið talin vera undir stjórn MAPkínasa boðleiðarinnar, reyndust hvorki háð KIT né MAPkínasa boðleiðnum.
    Með því að greina krystalbyggingu MITF próteinsins tókst að útskýra hvernig MITF takmarkar tvenndarmyndunargetu sína við sig sjálft, auk TFE3, TFEB og TFEC próteinanna. Krystallinn útskýrir einnig hvernig tiltekin MITF stökkbreyting veldur innangensuppbót (interalleleic complementation).
    Rannsókn þessi á KIT og MITF hefur leitt í ljós að boðleiðirnar milli þessara próteina eru fleiri en áður var talið. Frekari greining þessara boðleiða er mikilvæg til að skilja hlutverk þeirra í venjulegri þroskun litfruma og í sortuæxlum.

Athugasemdir

Doktorsritgerð skrifuð við læknadeildir Háskóla Íslands og Háskólans í Lundi

Samþykkt
18.9.2013


Skrár
NafnRaðanlegtStærðRaðanlegtAðgangurRaðanlegtLýsingRaðanlegtSkráartegund
Phung_thesis.pdf3,5MBOpinn Heildartexti PDF Skoða/Opna