ÍslenskaenEnglish

Aðilar að Skemmunni

Leit eftir:


LokaverkefniHáskóli Íslands>Heilbrigðisvísindasvið>Meistaraprófsritgerðir>

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/18220

Titlar
  • en

    The effects of outdated human platelet lysate on cartilage differentiation in mesenchymal stem cells and human embryonic derived mesenchymal progenitor cells

  • Áhrif lýsata, unnin úr útrunnum blóðflögueiningum, á brjósksérhæfingu mesenchymal stofnfrumna og mennskra fósturstofnfrumna sem eru sérhæfðar í mesenchymal forverafrumur

Skilað
Júní 2014
Útdrættir
  • Brjósk er teygjanlegur bandvefur sem finnst á ýmsum stöðum í mannslíkamanum, til að mynda í liðum, eyrum, nefi, lungnapípum, hryggþófa og í brjóstkassa. Brjóskvefurinn er án æðakerfis og samanstendur af brjóskfrumum og utanfrumuefni, sem er ríkt af collageni, proteoglycans og elastín þráðum, meðal annars. Brjóskvefurinn er án æðakerfis, sem veldur takmarkaðri hæfni vefsins til viðgerðar. Brjóskfrumur eiga rætur sínar að rekja til mesenchymal stofnfrumna (MSCs). MSCs eru fjölhæfar frumur sem geta sérhæft sig yfir í bein-, brjósk- og fitufrumur. Einnig hafa þær hæfni til ónæmismótunar og því eru bundnar miklar vonir við notkun MSCs í læknisfræðilegar meðferðir. Erfiðlega hefur gengið að nota frumurnar í rannsóknum vegna meðal annars gjafabreytileika og hversu skammlífar þær eru. Nýlega tókst að sérhæfa fósturstofnfrumur yfir í mesenchymal forverafrumur (hES-MP) og sýnt hefur verið fram á að þær hafi svipaða eiginleika og MSCs hvað varðar útlit, svipgerðartjáningu og sérhæfingargetu. Þessir eiginleikar gera hES-MP frumur að góðum kosti fyrir til að mynda rannsóknir á brjóski. Kálfasermi (FBS) er mest notaða ræktunaríbætið fyrir ræktanir á stofnfrumum. Það telst hins vegar ekki fýsilegur kostur við læknisfræðilegar meðferðir vegna smithættu og siðferðislegra vandamála varðandi velferð dýra. Blóðflögulýsöt, unnin úr útrunnum blóðflögueiningum (HPLO), gætu mögulega gegnt hlutverki kálfasermis og hefur notkun þess við ræktun MSCs reynst vel.
    MSCs og hES-MP frumur voru sérhæfðar í brjóskkúlur með þremur mismunandi brjósksérhæfingarætum. Þau voru 10% FBS æti, 10% HPLO æti og æti sem innihélt ekki ræktunaríbæti. Brjóskkúlurnar voru metnar eftir 7, 14, 28 og 35 daga í sérhæfingu með GAG prófi, vefjalitunum og RT-qPCR.
    Niðurstöðurnar benda til þess að bæði MSC og hES-MP brjóskkúlurnar sem sérhæfðar voru í 10% HPLO, framleiða meira utanfrumuefni en brjóskkúlurnar úr öðrum ætum. Genatjáningin sýnir hins vegar að tjáning Aggrecan og COMP var lægri í MSC brjóskkúlum sem voru sérhæfðar í 10% HPLO en í brjóskkúlum ræktaðar í hinum tveimur ætunum. Auk þess var tjáning SOX9 lægri í hES-MP brjóskkúlum eftir sérhæfingu í 10% HPLO.
    Mögulega er hægt að nota útrunnin blóðflögulýsöt sem ræktunaríbæti fyrir brjósksérhæfingu hES-MP og MSC frumna. Þó er nauðsynlegt að gera fleiri rannsóknir til að rannsaka hvað veldur þessari breyttu genatjáningu í brjóskkúlum sem hafa verið sérhæfðar í HPLO.

  • en

    Cartilage is a connective tissue found in various parts of the human body including the joints, ear, nose, bronchial tubes, intervertebral disc and the rib cage. Cartilage is avascular tissue comprised of chondrocytes and extracellular matrix (ECM) proteins including collagen, fibers, proteoglycans and elastin fibers. Since cartilage tissue is avascular, it has limited repair ability and a slow growth rate leading to limited repair capabilities. Chondrocytes are derived from mesenchymal stem cells (MSCs), which are multipotent cells that can differentiate into osteocytes, adipocytes and chondrocytes. Additionally, MSCs have been shown to have trophic effect on their surroundings, anti-inflammatory effect and immunomodulatory effect. This has made MSCs an interesting candidate for use in regenerative medicine and tissue engineering. Using MSCs in experimental models has been problematic due to their limited expansion capacity and variation between donors. Recently, mesenchymal progenitors were derived from human embryonic stem cells (hES-MP). It has been shown that hES-MP cells have similar characteristics as MSCs, regarding their morphology, phenotype and differentiation potential, making hES-MP cells a good candidate for analysis of e.g. chondrocyte differentiation. Fetal bovine serum (FBS) is the most used supplementary media for stem cell expansion. However, this supplement may not be the optimal choice of cells that are to be used in regenerative medicine e.g. due to contamination risks and animal welfare ethical issues. Lysates made from outdated human platelets (HPLO) could possibly substitute FBS as a supplementary media and it has been tested on MSCs with good results.
    In this thesis, MSCs and hES-MP cells were differentiated to chondrocyte micromass pellets structures with three different types of chondrogenic differentiation media containing either 10% FBS, 10% HPLO or without additional supplements. These chondrocytic pellets were then evaluated after 7, 14, 28 and 35 days of differentiation with GAG assay, histological stainings and RT-qPCR.
    Results show that both MSC and hES-MP chondrocytic pellets, differentiated with 10% HPLO, produce more extracellular matrix than pellets differentiated from other media. However, the gene expression shows that the expression of Aggrecan and COMP was lower in MSC pellets differentiated with 10% than pellets from other media and the expression of SOX9 was lower in hES-MP pellets differentiated with 10% HPLO.
    There is a possibility of using HPLO as a supplementary media for cartilage differentiation in MSCs and hES-MP cells. It is however necessary to determine what factors are causing this changed gene expression in chondrocytic pellets differentiated with HPLO.

Samþykkt
13.5.2014


Skrár
NafnRaðanlegtStærðRaðanlegtAðgangurRaðanlegtLýsingRaðanlegtSkráartegund
Kristbjorg_Gunnars... .pdf6,69MBOpinn Heildartexti PDF Skoða/Opna