is Íslenska en English

Lokaverkefni (Meistara)

Háskóli Íslands > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/21850

Titill: 
  • Titill er á ensku The nuclear localization and stability of the MITF transcription factor
  • Kjarnstaðsetning og stöðugleiki umritunarþáttarins MITF
Námsstig: 
  • Meistara
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) regulates development and differentiation of melanocytes and is a key component in formation of melanoma. Although MITF is primarily nuclear in melanocytes and melanoma cells, little is known about how sub-cellular localization of MITF is regulated in these cells. In this project we characterize which domains of the MITF protein are involved in determining nuclear localization and protein stability.
    We generated EGFP-MITF fusion constructs carrying wild-type and mutant versions of MITF and transfected into human 501Mel (melanoma) and HEK 293T (embryonic kidney) cells to map which domains of MITF are involved in nuclear localization and protein stability. The subcellular location and stability of MITF were determined using a confocal microscope and western analysis with or without pathway-specific inhibitors.
    We observed that a monopartite nuclear localization signal is located in the basic domain of MITF and is required for the nuclear localization of MITF. However, since a MITF protein lacking the entire basic domain is still able to enter the nucleus, it is likely that other regions also impact on nuclear localization. Neither DNA binding nor dimerization are necessary for nuclear retention of MITF. We also showed that MITF is degraded at least partly through the autophagosomal pathway.
    We have localized the major nuclear localization signal in MITF and shown that the protein is degraded through the autophagosomal pathway.

  • Umritunarþátturinn MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) stjórnar þroskun og sérhæfingu litfruma og er mikilvægur áhættuþáttur í myndun sortuæxla (melanoma). Þótt MITF sé að mestu leyti staðsett í kjarna lit- og sortuæxlisfruma þá er lítið vitað um það hvernig staðsetningu þess er stjórnað í þessum frumum. Í þessu verkefni kortleggjum við hvaða svæði MITF próteinsins hafa áhrif á kjarnstaðsetningu próteinsins. Einnig skoðum við hvaða svæði próteinsins hafa áhrif á stöðuleika þess.
    Til að gera þetta var útbúin genaferja sem tjáir EGFP-MITF samrunaprótein og stökkbreytingar útbúnar sem breyta tilteknum hlutum MITF próteinsins. Genaferjunni var komið fyrir í bæði 501Mel sortuæxlisfrumum og í HEK 293T frumum og staðsetning stökkbreyttu próteinanna í frumunum borin saman við staðsetningu villigerðar-MITF. Staðsetning og stöðuleiki próteinsins var ákvarðað með lagsjá (confocal microscope) og Western blot greiningu, með og án sérhæfðra hindra.
    Niðurstöðurnar sýna að merki um staðsetningu í kjarna er staðsett í basíska hneppi (basic domain) MITF próteinsins. Þar sem stökkbreytt MITF án basíska hneppisins kemst inn í kjarna teljum við líklegt að önnur svæði í MITF hafi einnig áhrif á staðsetningu próteinsins í kjarna. Hvorki er þörf á DNA bindingu né tvenndarmyndun til þess að MITF próteinið haldist inn í kjarna. Við sýnum líka að MITF er að hluta til brotið niður með sjálfsáti og að svæði í carboxyl-enda próteinsins er mikilvægt fyrir þetta ferli.
    Við höfum því staðsett kjarna-merki í MITF og sýnum að próteinið er brotið niður með sjálfsáti.

Samþykkt: 
  • 2.6.2015
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/21850


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
Sigurður Rúnar Guðmundsson.pdf2.33 MBOpinnHeildartextiPDFSkoða/Opna