is Íslenska en English

Lokaverkefni (Bakkalár)

Háskóli Íslands > Verkfræði- og náttúruvísindasvið > B.S. verkefni - Verkfræði- og náttúruvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/24918

Titill: 
  • Titill er á ensku Effects of signaling on subcellular localization of MITF
Námsstig: 
  • Bakkalár
Útdráttur: 
  • Umritunarþátturinn MITF er þekktur fyrir að vera aðal stjórnþátturinn í litfrumum og spilar einnig stóran þátt í sortuæxlum. Vitað er að MITF er stjórnað af boðferlum, eins og MAPK boðferlinum en í honum er boðum miðlað með fosfórýlerun próteina. Dregið er úr virkni MAPK boðferilsins í að minnsta kosti 90% sortuæxla. Fosfórýlerun umritunarþátta getur haft áhrif á virkni þeirra, stöðugleika, prótein samskipti og innanfrumu staðsetningu þeirra. Ekki er mikið vitað um áhrif fosfórýlerunar á MITF en það er að jafnaði samþykkt að þegar serín set 73 og 409 eru fosfórýleruð hefur það áhrif á bæði umritunarvirkni og stöðugleika. Litrófsmælingar hafa gefið til kynna nokkur serín set í MITF sem eru fosfórýleruð en áhrif fosfórýleringarinnar hafa ekki verið rannsökuð. Markmið þessa verkefnis var að rannsaka hvernig mismunandi fosfórýleruð serín set hafa áhrif á staðsetningu MITF í frumu. Til að rannsaka þetta var notast við mismunandi serín set í MITF sem var áður búið að stökkbreyta í annaðhvort alanín (hindrar fosfórýlerun) eða glútamik sýru (líkir eftir fosfórýlerun). Í þessari rannsókn voru þessi stökkbreyttu MITF plasmíð sem jafnframt voru FLAG-merkt, yfirtjáð í mennsku sortuæxlisfrumulínunni Skmel28, en þessi frumulína ber BRAF stökkbreytingu (V600E) sem veldur ofvirkum MAPK boðferli. Mótefnalitun var svo framkvæmd og lagsjárskoðun notuð til að ákvarða staðsetningu stökkbreytts og venjulegs MITF innan frumu. Styrkleikamæling leiddi í ljós að stökkbreytingarnar S73A, S307A, S307E, S409A, S73/409A og S73/307A/409A höfðu allar áhrif á staðsetningu MITF innan frumu.

  • Útdráttur er á ensku

    Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) is the master regulator of melanocytes and plays a crucial role in melanoma. MITF is known from the literature to be regulated by signaling, for example through the MAPK pathway which mediates signals with protein phosphorylations. The MAPK pathway is deregulated in at least 90% of all melanomas. When transcription factors are phosphorylated, it can affect their activity, stability, protein interactions and their subcellular localization. Not much is known about the effects of phosphorylation on MITF but it is generally accepted that when phosphorylated at serine sites 73 and 409, both its transcriptional activity and stability are affected. Mass spectrometry analysis has revealed several serine sites in MITF that are phosphorylated but the effects have not been investigated. The aim of this study was to investigate how various serine phosphorylations affect MITF’s subcellular localization. To investigate this, various serine sites in MITF had previously been mutated to either alanine (inhibits phosphorylation) or glutamic acid (mimics the phosphorylated state). In this study, these mutant FLAG-tagged constructs were overexpressed in the human melanoma cell line Skmel28 carrying a BRAF mutation (V600E) and therefore exhibiting a hyperactive MAPK pathway. Immunostainings were then performed, and to determine the subcellular localization of the serine mutants to the wild type protein, confocal microscopy was used. Intensity quantifications revealed that the mutations S73A, S307A, S307E, S409A, S73/409A and S73/307A/409A all affected the subcellular localization of MITF in terms of changes in nuclear and/or cytoplasmic staining intensity.

Samþykkt: 
  • 6.6.2016
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/24918


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
BSc_EddaSigrun.pdf4.57 MBOpinnHeildartextiPDFSkoða/Opna