en English is Íslenska

Thesis University of Iceland > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1946/14592

Title: 
  • Effects of Protolichesterinic Acid on Lipid Composition in Cultured Cancer Cells
  • Title is in Icelandic Áhrif prótólichesterínsýru á lípíðsamsetningu í ræktuðum krabbameinsfrumum
Submitted: 
  • June 2013
Abstract: 
  • Cancer is characterized by uncontrolled cell growth, proliferation and survival. This is accompanied by marked changes in cellular metabolism. Lipids play an important role in regulation of various cellular signals that are altered in cancer cells. HETEs are involved in cell signaling and growth and their synthesis has been shown to be induced in cancer cells due to enhanced lipoxygenase (LOX) activity. Increased 5- and/or 12-LOX expression has been detected in various types of cancer including pancreatic cancer. The lichen secondary metabolite protolichesterinic acid (PA) has been found to be a potent 5-, and 12-LOX inhibitor. Liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) is one of the most specific and sensitive methods for quantitative analysis of lipids.
    The aims of this project were to develop an efficient sample preparation method for isolation of the lipids 5-HETE, 12-HETE and LTB4 from cultured ASPC1 pancreatic cancer cells and to treat them with PA and quantify the lipids by LC-MS/MS after sample clean-up.
    The results of the method development show that protein precipitation (PPT) with methanol (MeOH) is the optimal sample preparation for extracting the lipids that are secreted into the medium. Liquid-liquid extraction (LLE) with hexane:ethyl acetate (1:1,v/v) was the optimal method for extracting the lipids from the cells. Acetonitrile in water (1:1, v/v) was the optimal solvent for reconditioning the samples after evaporation.
    The optimized methods were then applied for the extraction of lipids from ASPC1 cells following treatment with PA, before the quantitative analysis by LC-MS/MS. The results of the initial experiments with 3-hour exposure to PA showed similar concentration of lipids after treatment with PA compared to control samples. One experiment treating the cells with PA for 8 hours, however, indicates a decrease in the concentration of lipids, both in the medium and in the cells. These results need to be confirmed with further experiment.

  • Abstract is in Icelandic

    Krabbamein einkennist af stjórnlausum frumuvexti ásamt fjölgun og lifun frumna. Þessu fylgja greinilegar breytingar á efnaskiptum frumunnar. Lípíð gegna mikilvægu hlutverki í stjórnun á ýmsum frumuboðum sem umbreytast í krabbmaeinsfrumum. Hydroxyeicosaenoic acids (HETEs) taka þátt í frumuboðum og frumuvexti og sýnt hefur verið fram á aukna myndun þeirra í krabbameinfrumum vegna aukinnar lipoxygenasa (LOX) virkni. Aukin tjáning á 5- og/eða 12-LOX hefur fundist í ýmsum tegundum krabbameina þ.á.m. briskrabbameini. Annars stigs fléttuefnið prótólichesterínsýra (PS) hefur sýnt hemjandi virkni á 5-, og/eða 12-LOX. Vökvagreining með raðtengdum massagreini (LC-MS/MS) er ein af þeim aðferðum sem hefur hvað mesta sértækni og næmni við magngreiningu á lípíðum.
    Markmið þessa verkefnis var að þróa skilvirka sýnameðhöndlunar aðferð til að einangra lípíðin 5-HETE, 12-HETE og LTB4 úr ræktuðum ASPC1 briskrabbameins frumum og að meðhöndla þær með PS og að magngreina lípíðin með LC-MS/MS eftir einangrun.
    Niðurstöður úr aðferðarþróuninni sýndu að próteinfelling með metanóli er ákjósanlegasta aðferðin til að einangra lípiðin sem frumurnar seyta í ætið. Vökva-vökva útdráttur með hexane:ethyl acetate (1:1, v/v) var ákjósanlegasta aðferðin til að einangra lípíðin úr frumunum. Acetonitril í vatni (1:1,v/v) var besti leysirinn til að enduruppleysa lípíðin eftir inngufun.
    Notast var við þær aðferðir sem þróaðar voru til að einangra lípíðin í ASPC1 frumum eftir meðferð með PS áður en þau voru magngreind með LC-MS/MS. Niðurstöður úr fyrstu tilraununum með 3 klukkustunda meðferð með PS sýndu svipaðan styrk á lípíðum eftir meðferð með PS borið saman við viðmiðunar sýni. Ein tilraun, þar sem frumur voru meðhöndlaðar með PS í 8 klukkustundir, gaf þó til kynna lækkun á styrk lípíðanna, bæði í ætinu og í frumunum sjálfum. Þörf er á frekari tilraunum til að staðfesta þessar niðurstöður.

Accepted: 
  • May 2, 2013
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/14592


Files in This Item:
Filename Size VisibilityDescriptionFormat 
Effects of Prolichesterinic acid on lipid composition.pdf2.64 MBLocked Until...2043/04/01HeildartextiPDF