en English is Íslenska

Thesis University of Iceland > Heilbrigðisvísindasvið > Diplómaritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/1946/21570

Title: 
  • Effect of red blood cell storage on in vitro erythrophagocytosis
  • is Áhrif geymslu rauðra blóðkorna á in vitro rauðkornaát
Keywords: 
Submitted: 
  • June 2015
Abstract: 
  • Blood transfusion is an essential part of modern healthcare. It is a life-saving intervention, which unfortunately, can have adverse clinical effects. Red blood cell transfusion is e.g. used in foetal medicine, in cases of trauma, in surgeries treating heart diseases and as a consequence of cancer therapy. Red blood cell concentrates are stored at 2-6 °C for up to 42 days. Storage of RBC concentrates makes it possible to have an inventory of relatively safe units available at most times. However longer storage results in damage to the RBCs, referred to as storage lesion. Storage lesions of RBCs are all the changes, both physical and metabolic, that occur to the RBC during the storage period. The longer the RBCs are stored, the more storage lesions they acquire, and a smaller proportion survives when it is transfused into the patient. Erythrophagocytosis is the process by which old or damaged RBCs are cleared in the body by phagocytic cells. The clinical implications of transfusing RBCs that have been stored for longer times are not well understood but are currently being studied vigorously. A recent meta-analysis of 21 studies concluded that a significantly increased mortality is associated with the transfusion of old blood compared to new blood. However, recent and larger studies found no links between older transfused blood and increased mortality. Whether old blood carries increased risk has been debated for quite some time and recent studies need to be reviewed thoroughly. The question remains whether results from numerous studies warrant changes in current clinical practices of blood transfusion.
    The objective of this study was to analyse how the age of stored RBCs affects erythrophagocytosis using the human monocytic cell line THP-1. To achieve this, THP-1 cells were co-cultured with PKH26-labelled RBCs and analysed with flow cytometry and fluorescence microscopy.
    Negligible phagocytosis was seen when undifferentiated THP-1 cells were used. However, differentiated THP-1 cells readily phagocytosed PKH26-labelled RBCs. Comparison of RBC units stored for 7, 19 and 40 days revealed minor differences.
    The cell line THP-1 is sensitive to overgrowth and changes in culture conditions and as a result it readily loses its ability to phagocytose. This is avoided by using differentiated THP-1 cells. However, this introduces considerable variability to the assay. The red fluorescence seen in the flow cytometric analysis of the erythrophagocytosis assay was the result of phagocytosis of PKH26-labelled RBCs. This was confirmed with photomicrographs and the inhibition of phagocytosis with the use of cytochalasin D.
    From our results it is not possible to conclude that longer storage affects erythrophagocytosis. Further development of the erythrophagocytosis assay is necessary.

  • is

    Blóðgjöf er mikilvægur hlekkur í nútíma læknisfræðilegri meðferð. Þrátt fyrir að blóðgjöf geti svo sannarlega oft verið lífgjöf, geta afleiðingar blóðgjafar einnig valdið vandamálum. Rauðkornaþykkni er gefið við ýmsar aðstæður, s.s. vegna áverka, við fósturlækningar og aðgerðir m.a. vegna hjartasjúkdóma og sem stuðningsmeðferð vegna krabbameinslækninga. Rauðkornaþykkni er geymt við 2-6 °C í allt að 42 daga. Geymsla rauðkornaþykknis í svo langan tíma gerir það mögulegt að hafa blóð tiltækt hverju sinni. Hins vegar hefur geymsla til lengri tíma þau áhrif að rauðkornin verða fyrir skaða sem kallaður hefur verið geymsluáverki (storage lesion). Geymsluáverkar eru allar þær skemmdir sem rauðkorn verða fyrir yfir geymslutímabilið, bæði við efnaskipti og vegna áþreifanlegs tjóns. Þeim mun lengur sem rauðkornin eru geymd, því meiri skemmdir eiga sér stað og minna hlutfall rauðkorna lifir af inngjöf í sjúkling. Rauðkornaát (erythrophagocytosis) er það ferli sem sér um að hreinsa gömul og skemmd rauðkorn í líkamanum. Klínískar afleiðingar þess að gefa rauðkorn, sem geymd hafa verið til lengri tíma, eru ekki vel þekktar, en um þessar mundir er verið að rannsaka þær af krafti. Nýleg rannsókn sýndi fram á að að dánartíðni eykst marktækt við gjöf eldra blóðs samanborið við nýlegra blóð. Hins vegar greindi önnur rannsókn frá því að ekki væru tengsl þar á milli. Hvort gjöf eldra blóðs ber með sér aukna áhættu hefur verið til umræðu lengi og nauðsynlegt er að fara vel yfir nýlegar rannsóknir. Spurning er hvort niðurstöður fjölmargra rannsókna feli í sér nægileg rök til þess að rétt sé að breyta klínískum leiðbeiningum við blóðgjöf.
    Markmið rannsóknarinnar var að rannsaka áhrif aldurs rauðkornaeininga á in vitro rauðkornaát með því að nota mennsku monocyta frumulínuna THP-1. THP-1 frumum var blandað saman við flúrmerkt rauðkorn og niðurstöðurnar greindar með frumuflæðissjá og flúrsmásjá.
    Frumuát var hverfandi þegar ósérhæfðar THP-1 frumur voru notaðar. Hins vegar, átu THP-1 frumur, sem höfðu verið sérhæfðar, rauðkornin mjög auðveldlega. Samanburður á rauðkornaeiningum, sem höfðu verið geymdar mislengi, sýndi smávægilegan mun á áhrifum geymslu rauðkorna.
    THP-1 frumulínan er viðkvæm fyrir ofvexti og breytingum á vaxtarskilyrðum og þar af leiðandi tapar hún getunni til frumuáts mjög auðveldlega. Þessu er hægt að komast hjá með því að nota THP-1 frumur sérhæfðar með PMA. Hins vegar, fjölgar það breytunum í rannsókninni. Rauða flúrljómunin sem sást í greiningu frumuflæðissjárinnar á rauðkornaátinu var afleiðing frumuáts THP-1 frumna á flúrmerktum rauðkornum. Þetta var staðfest með smásjármyndum og hindrun frumuáts með cytochalasin D.
    Niðurstöðurnar benda ekki til þess að lengri geymsla hafi áhrif á rauðkornaát. Þróa þarf þessa aðferð frekar.

Accepted: 
  • May 20, 2015
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/21570


Files in This Item:
Filename Size VisibilityDescriptionFormat 
Snaedis Vala Kristleifsdottir_Diplomaritgerd.pdf1.51 MBOpenHeildartextiPDFView/Open