ESBL-producing Escherichia coli: a molecular study on bacterial relatedness and resistance genes in isolates from the period 2006-2014

Abstract

Introduction. The prevalence of extended-spectrum β-lactamases (ESBL) in members of the Enterobacteriaceae family increases steadily and causes difficulties in the treatment of infectious diseases. Escherichia coli is the commonest pathogen in the family and the most prevalent ESBL in this species is the CTX-M-15 derivative. The blaCTX-M-15 gene has spread rapidly around the world, in part via the transmissive E. coli ST131. The prevalence of ESBL-producing E. coli in Iceland is low but rising. Although nosocomial outbreaks due to E. coli are uncommon, such an outbreak occurred recently at Landspítali – The University Hospital of Iceland. Information about bla genotypes in E. coli is incomplete in Iceland, and no studies have been published on phylogenetic and multilocus sequence typing (MLST) of E. coli in the country. Methods. The objective of the study was to perform molecular typing with regard to clonality, phylogeny, bla genes and MLST of ESBL-producing E. coli from community acquired infections during the years 2006-2012 and from an outbreak that occurred in the neonatal intensive care unit (NICU) at Landspítali in early 2014. All community isolates selected for this study were examined with pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of macroresticted DNA, and typing of phylogeny groups and bla genes with PCR. All NICU isolates were analyzed with PFGE, and a selected subgroup was subjected to typing of phylogeny groups and bla genes. Six community isolates and one NICU isolate were analyzed with MLST.Results. A total of 138 community isolates, from as many patients, were analyzed. PFGE analysis revealed 126 clones and 36% and 37% of all isolates belonged to phylogroups B2 and D, respectively. blaCTX-M, blaSHV and blaTEM were detected in 112, 14 and 73 isolates, respectively. Sequencing of blaCTX-M, genes was done for 42 CTX-M positive isolates; 21 produced CTX-M-15. MLST revealed ST43 (corresponds to ST131) for the six community isolates analyzed. A total of 37 NICU isolates (from 25 infants, three family members and three environmental samples) were analyzed. PFGE revealed that 20 infants and one environmental sample shared the outbreak clone, which belonged to phylogroup D and produced CTX-M-14. MLST was performed on one isolate and revealed ST8.Conclusion. This project completes the first systematic study on bla genotypes and provides the first data about phylogenetic groups and multilocus sequence types of E. coli in Iceland. The results confirmed that CTX-M-15 has become the predominant ESBL genotype and that the fast spreading international clone ST131 has reached Iceland. This research also describes the first known NICU outbreak caused by a CTX-M-14-producing E. coli of phylogenetic group D.

Inngangur. Algengi breiðvirkra β-laktamasa (ESBL) í bakteríum af ætt Enterobacteriaceae fer vaxandi og veldur erfiðleikum í meðferð smitsjúkdóma. Escherichia coli er mikilvægasti meinvaldurinn í hópi þessara baktería og algengasta ESBL afleiðan í tegundinni er CTX-M-15. blaCTX-M-15 genið hefur breiðst hratt út í heiminum, að hluta til með E. coli ST131 sem hefur mikla smitgetu. Algengi ESBL-myndandi E. coli er lágt á Íslandi en hefur aukist undanfarin tíu ár. Spítalafaraldrar af völdum E. coli eru sjaldgæfir, en slíkur faraldur varð nýlega á Landspítala háskólasjúkrahúsi. Rannsóknir á arfgerðum bla gena í E. coli hófust nýlega á Íslandi en er ólokið og engar rannsóknir hafa birst um þróunarhópa og fjölgenaarfgerðir (MLST) bakteríunnar hér á landi.Efni og aðferðir. Markmið þessarar rannsóknar var að kanna sameindafræðilegan skyldleika og ónæmisgen ESBL-myndandi E. coli úr utanspítalasýkingum frá tímabilinu 2006-2012 og úr faraldri sem varð á vökudeild Landspítlans snemma ársins 2014. Allir bakteríustofnar úr utanspítalasýkingum voru rannsakaðir með rafdrætti á meltu erfðaefni í púlssviði (PFGE), og þróunarhópa- og bla arfgerðagreiningu með kjarnsýrumögnun (PCR). Allir stofnar frá vökudeild voru rannsakaðir með PFGE og valið úrtak var greint m.t.t. þróunarhópa og bla arfgerða. Einungis sex stofnar úr utanspítalasýkingum og einn frá vökudeild voru valdir fyrir MLST greiningu.Niðurstöður. Alls voru 138 samfélagsstofnar frá jafnmörgum sjúklingum rannsakaðir. PFGE leiddi í ljós 126 klóna og þróunarhópagreining sýndi að 36% stofnanna tilheyrðu hóp B2 og 37% tilheyrðu D. blaCTX-M fannst í 112 stofnum, blaSHV í 14 og and blaTEM í 73. Helmingur af hinum 42 CTX-M jákvæðu stofnum sem gengust undir raðgreiningu á bla genum mynduðu CTX-M-15. MLST greining leiddi í ljós ST43 (samsvarar ST131) fyrir alla sex stofnana. Alls voru 37 vökudeildarstofnar (frá 25 nýburum, þremur fjölskyldumeðlimum og þremur umhverfissýnum) rannsakaðir. PFGE sýndi að stofnar frá 20 börnum og einu umhverfissýni voru samklóna og faraldursklónninn tilheyrði þróunarhópi D og myndaði CTX-M-14. MLST greining sýndi ST8 fyrir þann stofn sem greindur var.Umræður. Með þessari rannsókn lýkur fyrstu kerfisbundnu rannsókninni á bla arfgerðum í E. coli og fást, í fyrsta sinn, upplýsingar um þróunarhópa og fjölgenaarfgerðir E. coli á Íslandi. Niðurstöður staðfesta að CTX-M-15 er orðin helsta ESBL arfgerðin hér á landi og að hin útbreidda ST131 hefur borist til landsins. Þessi rannsókn lýsir einnig fyrsta vökudeildarfaraldri sem orsakast af CTX-M-14-myndandi E. coli af þróunarhóp D.