Griptækni til greiningar kítínasa og kítínbindandi prótína

Abstract

Verkefnið felur í sér smíði á gripefnum og skoðun á hæfni þeirra til þess að bindakítínasa og kítínbindandi prótín úr ræktunarvökva sveppsins T.Emersonii.Forhreinsun er gerð á vökvanum með því að nota ammoníum súlfat fellingu ogskoðað verður með rafdrætti samsetningu prótínanna í lausninni. Í ljós kom aðfæðulausnin innihélt prótín með mólmassa á bilinu 130-15 kDA, og mest af prótínumsem hafa mólmassa á bilinu 59 til 20 kDa. Gripefnin þrjú sem voru smíðuð voru öllmeð T-ChOS (Chitooligomers) tengil en með mismunandi griparma (spacer). Þaðgripefni sem reyndist vera best var AC2 sem er þríklóróþríazín virkjaður Sepharósi.Reyndist bindigeta hans vera um 1 mg prótíns fyrir 1 g stoðefni. FPLC tæki fráPharmacia Biotech var notað til þess að skima fyrir prótínum í lausninni og rafdrátturvar framkvæmdur til þess að skoða stærðir prótína sem bindast á griphópana. Í ljóskom að gripefnin þrjú voru að binda prótín sem voru með mólmassana 58, 38, 36, 34og 25 kDa. Gripefnin eru því að binda þau prótín sem mest er af í lausninni.