is Íslenska en English

Lokaverkefni (Meistara)

Háskóli Íslands > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/29859

Titill: 
  • Titill er á ensku A MALDI-MSI method to detect neuropeptides in the basal ganglia of the brain
  • MALDI-massamyndgreiningaraðferð til að greina taupapeptíð í basal ganglia í heilanum
Námsstig: 
  • Meistara
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    Background: Neuropeptides (NPs) are important signaling molecules in the brain. They are secreted in distinct areas of the brain, such as the basal ganglia, and abnormal secretion can be associated to various neurological diseases. Because of their low concentrations in the brain sensitive methods are needed to detect and analyze them. In this thesis a matrix assisted laser desorption/ionization – mass spectrometry imaging (MALDI-MSI) method is developed for mapping NPs.
    Objectives: The objective was to develop a method to detect NPs in the basal ganglia in rats with a MALDI-MSI instrument. The secondary aim was to test the method out on parkinsonian 6-OHDA lesioned rat model with or without L-DOPA treatment.
    Methods: Control rat brains were used to develop the method. First step of the procedure was to find an appropriate washing procedure. Five washing protocols were tested and compared. When the suitable sample washing had been determined the matrix application could be optimized. Parameters like concentration of matrix, matrix solution solvent and composition was optimized. The matrix was sprayed on with different flow rates and passes. Different temperatures were tested.
    Results: A short chloroform wash was the most successful procedure. The matrix solution with 25 mg/mL DHB in 50% ACN in water and 0.2% TFA gave the best signal enhancement. The optimal spraying parameters were a flow rate 120 μL/min and 4 passes at 85°C. The method could be applied to a 6-OHDA lesioned rat model.
    Conclusion: The method developed in this thesis is promising. Not only did it detect greater number of NPs than ever published in a mammalian brain before but it also detected NPs never previously detected with MALDI-MSI.

  • Bakgrunnur: Taugapeptíð eru lítil boðefni í heilanum. Þeim er oftast seytt í lágum styrk á sérstökum svæðum í heilanum og getur seyting þeirra verið breytileg í taugasjúkdómum. Mörg taugapeptíð eru fundin í basal ganglia sem er stöð í heilanum sem samþættir taugaboð. Þar sem taugapeptíð eru seytt í lágum styrk þarf mjög nákvæma aðferð til að greina þau. Í þessari rannsókn er MALDI-massamyndgreiningaraðferð þróuð til að greyna taugapeptíð.
    Markmið: Aðalmarkmið þessarar tilraunar var að þróa MALDI-massamyngreiningaraðferð til að greina taugapeptíð í basal ganglia í rottum. Þegar aðferðin hafði verið þróuð var hún prófuð á rottum sem höfðu fengið 6-OHDA taugaeitur ásamt því að sumar þeirra höfðu fengið L-DOPA skammt.
    Aðferðir: Rottuheilar voru notaðir við aðferðarþróunina. Fyrsta skrefið var að finna réttan þvott og voru fimm þvottar voru prófaðir og bornir saman. Þegar góður þvottur hafði verið fundin var matrix aðferðin þróuð. Nokkrir þættir eins og styrkur matrix, samsettning og leysir lausnarinnar gátu verið hámarkaðir. Á matrix-spreyjernum var ákvaðrað hraða flæðis og fjölda ferða yfir vefinn. Mismunandi hitastig voru prófuð.
    Niðurstöður: Stutt chloroform skol reyndist vera besti þvotturinn. Matrix með 25 mg/mL DHB og 50% ACN í vatni með 0.2% TFA reyndist gefa góðar niðurstöður. Þættir spreyisins sem voru hámarkaðir voru flæðihraði 120 µL/mín og 4 ferðir við 85°C. Aðferðin gat verið prófuð á 6-OHDA meðhöndluðum heilavefi.
    Ályktanir: MALDI-massamyndreiningaraðferðin sem var þróuð heppnaðist vel. Ekki bara greindi hún fleiri taugapeptíð en aðrar sambærilegar aðferðir heldur einnig greindu hún peptíð sem hafa ekki áður fundist með þessum tækjabúnaði í spendýrum.

Samþykkt: 
  • 25.4.2018
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/29859


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
master thesis_halla.pdf3.12 MBLokaður til...30.04.2023HeildartextiPDF
lokaverkefni009.pdf5.25 MBLokaðurYfirlýsingPDF