is Íslenska en English

Lokaverkefni (Meistara)

Háskóli Íslands > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/33204

Titill: 
  • Titill er á ensku The effects of adjuvants on germinal centers and TNF-signalling pathways which are important for activation and survival of B cells in neonatal mice
  • Áhrif ónæmisglæða á kímstöðvar og TNF-boðferla sem eru mikilvægir fyrir virkjun og lifun B frumna í nýburamúsum
Námsstig: 
  • Meistara
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    The immune system of neonates is immature which leads to increased susceptibility to infections and poor vaccine responses. Antibody (Ab) responses in neonates are characterized by limited induction of germinal centers (GCs) which results in the formation of very few and short-lived Ab-secreting cells (AbSCs). Adjuvants can however enhance the magnitude and duration of immune responses. The aim of this project was to compare the effects of five different adjuvants: LT-K63, mmCT, MF59, IC31 and alum, on GC induction and the TNF-signalling pathway in relation to vaccine specific Abs and AbSC in spleen and bone marrow (BM) in neonatal mice. Neonatal mice were immunized with the model vaccine tetanus-toxoid (TT) with or without an adjuvant. Saline only was used as a negative control group. At different time points after immunization spleen, BM and serum was collected for immunofluorescence staining, phenotyping of lymphoid cells by flow cytometry, and measurements of TT-specific IgG Abs by ELISA and IgG+ AbSC by ELISPOT. The results revealed that 14 days after immunization, mmCT was the only adjuvant capable of eliciting a significantly improved formation of GCs compared with vaccine alone. At day 14, TT-specific IgG Ab levels in serum were significantly higher in all adjuvant groups than in vaccine only group and the number of TT-specific IgG+ AbSCs in spleen and BM were significantly higher in mice immunized with mmCT or MF59 than vaccine only. Eight days after immunization all groups that had received an adjuvant had significantly higher TT-specific IgG levels in serum than the vaccine only group. Immunofluorescence staining showed that 8 days after immunization, mmCT was the only group with significantly increased GC induction, like seen on day 14. Eight days after immunization, IC31 group tended to have higher expression of the TNF receptors, although this increased expression was only statistically significant for MZ B cells compared with saline and vaccine only groups. LT-K63 and IC31 groups also induced significantly higher numbers of CD138+B220neg plasmablasts/plasma cells and their expression of TACI compared with vaccine only group 8 days after immunization. The groups that were immunized with LT-K63, mmCT, MF59 or IC31 had significantly higher levels of TT-specific IgG Abs in serum 14, 28 and 42 days after immunization than vaccine only group. TT-specific IgG+ AbSCs were also enumerated in BM 42 days after immunization and only mice immunized with MF59 had significantly higher number of AbSCs than vaccine only group. The results of this study indicate that of the adjuvants tested, mmCT is the one that preferably induced GC activation, but MF59 induced migration and maintenance of AbSCs in BM. All the adjuvants except for alum induced long-term persistent Ab responses in serum. The effects of the adjuvants on the TNF-signalling pathway require further investigation.

  • Ónæmiskerfi nýbura er vanþroskað, sem veldur auknu næmi fyrir sýkingum og lélegri svörun við bólusetningum. Mótefnasvör eru dauf og lækka hratt, myndun kímstöðva sem eru aðal sérhæfingarstaðir B frumna er takmörkuð í nýburum sem orsakar myndun fárra mótefnaseytandi frumna með takmarkaða lifun. Ónæmisglæðar geta hins vegar aukið ónæmissvör við bólusetningum. Markmið þessa verkefnis var að bera saman áhrif ónæmisglæðanna LT-K63, mmCT, MF59, IC31 og alum á virkjun kímstöðva og TNF-boðferla í tengslum við áhrif þeirra á mótefnaseytandi frumur og mótefnamyndun í nýburamúsum. Nýburamýs voru bólusettar með tetanus-toxoid (TT), með eða án ónæmiglæðis. Viðmiðunarhópur fékk bara saltvatn. Á mismunandi tímapunktum eftir bólusetningu voru miltu, beinmergur og blóðsýni tekin til vefjalitana, greiningar frumuhópa með frumuflæðisjá, mælinga mótefna með ELISA og mótefnaseytandi frumna með ELISPOT. Mýs sem voru aflífaðar 14 dögum eftir bólusetningu sýndu að sá hópur sem var bólusettur með mmCT hafði aukinn fjölda kímstöðva og hærra hlutfall kímstöðva/eitilbúa en sá hópur sem einungis fékk bóluefnið. Þeir hópar sem voru bólusettir með ónæmisglæði höfðu allir marktækt hærri TT-sértæk IgG mótefni í sermi og fjöldi TT-sértækra IgG+ mótefnaseytandi frumna í milta og beinmerg var marktækt hærri í þeim hópum sem voru bólusettir með mmCT eða MF59. Átta dögum eftir bólusetningu höfðu þeir hópar sem voru bólusettir með ónæmisglæði marktækt hærri sértæk IgG mótefni í sermi. Vefjalitunin sýndi einnig að 8 dögum eftir bólusetningu var hópurinn sem fékk mmCT sá eini sem hafði aukinn fjölda kímstöðva og hærra hlutfall kímstöðva/eitilbúa, líkt og á degi 14. Átta dögum eftir bólusetningu hafði hópurinn sem var bólusettur með IC31 almennt þá tilhneigingu að vera með háa tjáningu af viðtökum TNF boðferilsins, en einungis marktæk hækkun sást á MZ B frumum samanborið við saltvatns- og bóluefnishópinn. Hóparnir sem fengu LT-K63 eða IC31 höfðu marktækt fleiri CD138+B220neg plasmablasta/plasma frumur og fleiri sem voru TACI jákvæðar í samanburði við hópinn sem fékk einungis bóluefnið. Þeir hópar sem fengu LT-K63, mmCT, MF59 eða IC31 höfðu hærra magn TT-sértækra IgG mótefna í sermi 14, 28 og 42 dögum eftir bólusetningu en hóparnir sem fengu alum eða bara bóluefni. Þegar sértækar IgG+ mótefnaseytandi frumur voru skoðaðar í beinmerg 42 dögum eftir bólusetningu sást að aðeins hópurinn sem fékk MF59 hafði marktækt fleiri frumur en sá sem fékk einungis bóluefnið. Niðurstöður úr þessari rannsókn benda til þess að af þeim ónæmisglæðum sem prófaðir voru, stuðli mmCT helst að virkjun kímstöðva, en MF59 sýndi fram á aukið far og viðhald mótefnaseytandi frumna í beinmerg. Allir ónæmisglæðarnar að alum frátöldum juku langtímamótefnasvör. Áhrif ónæmisglæðanna á TNF-boðferilinn þarfnast frekari rannsókna.

Samþykkt: 
  • 24.5.2019
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/33204


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
MS_Ritgerd_GJM_Loka.pdf8.03 MBOpinnHeildartextiPDFSkoða/Opna
Yfirlýsing.pdf238.47 kBLokaðurYfirlýsingPDF