is Íslenska en English

Lokaverkefni (Bakkalár) Háskóli Íslands > Verkfræði- og náttúruvísindasvið > B.S. verkefni - Verkfræði- og náttúruvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/33318

Titill: 
  • Titill er á ensku Transformation of P. tricornutum by electroporation
Námsstig: 
  • Bakkalár
Efnisorð: 
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    The objective of this project was to transform the diatom P. tricornutum by electroporation
    in order to optimize the method. A test protocol was composed in order to incorporate zeocin
    resistant pPha-T1-GFP plasmid, linearized by ScaI-HF digestion. Transformation of P.
    tricornutum with electroporation is not entirely new nor is it common either due to poor
    yield of transformants. Electroporation is a method that offers simple solutions, especially if
    it’s combined with a successful optimizing protocol. It´s commonly thought that the
    electroporation itself is a major factor in limited viability but other aspects have not really
    been pursued as preparation steps regarding the procedure might also be a limiting factor
    e.g. even the centrifuge speed could compromise the yield. As it turned out the centrifuge
    speed was limiting viable cells, either by killing them before electrophoresis or leaving them
    to week to survive the electroporation. After adjustments of the protocol, viable
    transformants emerged that were verified by their selective markers i.e. showing zeocin
    resistance and expression of eGFP.

  • Markmið þessa verkefnis var að umbreyta kísilþörungnum P. tricornutum með rafgötun til
    að bæta heimtur. Tilraunaáætlun var sett saman til þess að koma inn zeocin þolnu pPha-T1-
    GFP plasmíði, klipptu með ScaI-HF skerðisensími. Umbreyting á P. tricronutum með
    rafgötun er ekki óþekkt aðferð en hún er almennt ekki talin hagkvæm þar sem hún gefur
    fremur litlar heimtur af lífvænlegum kísilþörungum. Rafgötun er í sjálfu sér einföld aðferð,
    sérstaklega ef mögulegt er að hámarka heimtur. Almennt er talið að rafgötunin sjálf leiði til
    lélegra heimta en fátt er um að leitað hafi verið eftir öðrum þáttum sem gætu haft neikvæð
    áhrif á heimturnar. Þar má nefna hraða skilvindu sem dæmi um takmarkandi þátt. Í reynd
    kom í ljós að harkalegur spuni í skilvindu takmarkaði lífvænlegar frumur, annaðhvort með
    því að drepa þær eða veikja þær of mikið til að þola rafgötunina. Breytingar voru gerðar á
    verklagi er leiddi til lífvænlegra, umbreyttra kísilþörunga sem síðan fékkst staðfest í gegnum
    sértæka merkingu m.ö.o. sýndu zeocin-þol og tjáningu á eGFP.

Samþykkt: 
  • 29.5.2019
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/33318


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
Transformation of P. tricornutum by electroporation BS.pdf619.64 kBLokaður til...22.06.2019HeildartextiPDF
Skemman_yfirlysing undirrituð.pdf69.58 kBLokaðurYfirlýsingPDF