is Íslenska en English

Lokaverkefni (Bakkalár) Háskóli Íslands > Verkfræði- og náttúruvísindasvið > B.S. verkefni - Verkfræði- og náttúruvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/33322

Titill: 
  • Titill er á ensku Phosphorylation of MITF S73 and its role in melanoma cell proliferation
Námsstig: 
  • Bakkalár
Efnisorð: 
Útdráttur: 
  • Sortuæxli er hættulegasta gerð húðkrabbameins og uppruni þess er rakinn til litfruma. Um 60% allra sortuæxla hafa BRAFV600E stökkbreytingu með þeim afleiðingum að MAPK boðferilinn verður ofvirkur. Umritunarþátturinn MITF (microphthalmia associated transcription factor) er afar mikilvægt stjórnprótein í litfrumum og sortuæxlum þar sem það hefur verið nefnt frumulínu sértækt æxlisgen. MITF er fosfórýlerað á serín73 (S73) vegna fyrrnefnds MAPK boðferils. Þessi ákveðna fosfórun hefur verið tengd umritunarvirkjun, niðurbroti og flutningi MITF úr kjarna. Hér skoðum við áhrif þessarar fosfórunar á umritunarhæfni MITF, hraða frumuskiptingar og frumufar í sortuæxlisfrumum. Til þess að skoða þetta voru gerðar tvær stökkbreytingar í villigerðar MITF, annars vegar S73A sem getur ekki verið fosfórað og S73E sem líkir eftir fosfórun á S73. Í ljós kom að stökkbrigðin tvö skiptu sér um tvöfalt hraðar en villigerð. Þar að auki hafði meðferð með sértækum S73 forfórunar hindra, vemurafenib (PLX), ólík áhrif á frumulínunnar háð arfgerð þeirra. Frumufar villigerðar MITF frumulínunnar var einnig minnkað. Mikilvæg prótein í stjórn frumuhringsins voru misjafnlega tjáð milli frumulína. Frumuhrings tengdu genin p21, CDC25A og CDC16 voru auk þess mis mikið umrituð í stökkbrigðunum miðað við villigerð. Tekið saman gefur þetta til kynna áhrif S73 fosfórunar á breytta umritun MITF og áhrif á frumufar og hraða frumuskiptinga í sortuæxlisfrumum.

  • Útdráttur er á ensku

    Melanoma is the most dangerous form of skin cancer and originates from malignantly transformed melanocytes. Around 60% of melanomas harbour an activating BRAFV600E mutation resulting in a hyperactive MAPK pathway. MITF (microphthalmia associated transcription factor) is a transcription factor with a crucial role in melanocyte biology and has been termed a lineage survival oncogene in melanoma. Interestingly, MITF becomes phosphorylated on serine73 (S73) as a result of MAPK signalling. Phosphorylated S73 has been implicated in transcriptional activation, degradation and nuclear export of MITF. In this project we explored whether S73 phosphorylation affects MITF’s target gene repertoire and its impact on cell proliferation and migration in melanoma cells. We generated two MITF mutants to characterize the role of S73 phosphorylation, an S73A mutant which cannot be phosphorylated and an S73E mutant which mimics phosphorylation. We found that the mutants proliferated nearly twice as fast as the wild-type MITF cell line. Furthermore, their response to the BRAFV600E inhibitor vemurafenib (PLX) had divergent effects on proliferation depending on the genotype. Migration capabilities of melanoma cells were also affected by MITF where the WT MITF cells showed decreased migration compared to the other cell lines. At the protein level, the cell lines also tended to differentially express some key cell-cycle proteins. We also found that the cell cycle regulators p21, CDC25A and CDC16 were differentially expressed at the transcript level in the mutants compared to the WT expressing cell line. These results implicate phosphorylated S73 in altering MITF transcription and impacting melanoma proliferation and migration.

Samþykkt: 
  • 29.5.2019
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/33322


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
Stefan BS thesis final.pdf1.26 MBLokaður til...20.05.2021HeildartextiPDF
yfirlysing stefan eggertsson.pdf457.94 kBLokaðurYfirlýsingPDF