Effects of altered gene expression of two AAA+ ATPases on neuromuscular synapses in Drosophila melanogaster

Abstract

The proteins Pontin and Reptin belong to the AAA+ ATPase family and their homologs have been found in all eukaryotes. They have been implicated with various complexes and play a vital role in chromatin remodeling. Despite that, other functions of these proteins are less known. In this project knock-downs of these proteins were examined with the emphasis on the effects on the neuromuscular junction of Drosophila melanogaster. The Gal4/UAS system was exploited for this purpose. Samples were stained with fluorescent dyes and imaged with a confocal microscope. Using the same crosses, third instar larvae were crossed on apple juice agar, heat-shocked and measured, for comparison on size-related phenotype. Finally, samples from Pontin-N-GFP and Reptin-N-GFP stocks, were prepared and image to determine the localization of these proteins within the nervous system.

Próteinin Pontin og Reptin tilheyra AAA+ ATPasa fjölskyldunni og hliðstæður þeirra hafa fundist í öllum heilkjörnungum. Þau hafa verið bendluð við ýmsa próteinflóka og skipa mikilvægan sess í frumuskiptingu. Þrátt fyrir það er önnur virkni próteinanna illa þekkt. Í þessu verkefni var tjáning próteinianna bæld og þau skoðuð með tilliti til taugavöðvamóta Drosophilu melanogaster. Notast var við Gal4/UAS kerfið í þeim tilgangi. Sýni voru lituð með flúrljómandi efnum og mynduð með lagsmásjá. Sömu krossar voru notaðir til samanburðar á stærðartengdri svipgerð. Þriðja stigs lirfur voru ræktaðar á agar með epladjús, þær voru svo snögghitaðar svo þær stífnuðu upp til frekari mælinga. Að lokum voru lirfur úr Pontin-N-GFP og Reptin-N-GFP stofnum undirbúnar fyrir samskonar skoðun í lagsmásjá í tilraun til að ákvarða staðsetningu þessara próteina innan taugakerfisins.