is Íslenska en English

Lokaverkefni (Bakkalár)

Háskóli Íslands > Verkfræði- og náttúruvísindasvið > B.S. verkefni - Verkfræði- og náttúruvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: http://hdl.handle.net/1946/37559

Titill: 
  • Próteinið Tip49 úr Sulfolobus acidocaldarius:Tjáning, hreinsun, uppbótar- og virknipróf
Námsstig: 
  • Bakkalár
Efnisorð: 
Útdráttur: 
  • Próteinin Tip48/Tip49 eða Rvb1/Rvb2 eru lífsnauðsynleg og finnast í stórum kjarna komplexum sem sinna ýmsum hlutverkum eins og að breyta litni, virkja umritun o.fl. Áhugi var fyrir því að skoða sérstaklega Tip49 próteinið úr arkeunni Sulfolobus acidocaldarius þar sem hún hefur einungis eitt eintak af geninu en heilkjörnungar hafa tvö eintök. Markmið þessa verkefnis var að smíða genaferju með Gibson klónun sem innihéldi tip49 genið úr S. acidocaldarius. Næst átti að ummynda gersveppastofna sem höfðu misst ýmist rvb1, rvb2 eða bæði genin með genaferjunni. Þannig átti að kanna hvort tip49 úr S. acidocaldarius gæti
    bætt upp missi genanna. Einnig átti að athuga hvort hægt væri að tjá villigerðar Tip49 ásamt stökkbrigðum af próteininu í Lemo21 (DE3) E.coli frumum, hreinsa það og mæla ATPasa virkni þess. Þó að tekist hafi að ummynda fjóra af fimm gersveppastofnunum þá bætti tip49 genið úr S.acidocaldarius ekki upp genatap gersveppanna. Það tókst að framleiða villigerðar útgáfu Tip49 próteinsins ásamt sex stökkbrigðum þess í Lemo21 (DE3) E.coli tjáningarbakteríunni og Tip49-WT og Tip-K76A próteinin voru hreinsuð en engin ATPasa virkni mældist.

  • Útdráttur er á ensku

    Tip48/Tip49 or Rvb1/Rvb2 are essential proteins that are found in critical cellular complexes that play essential roles in vital processes such as transcription, DNA repair, and chromatin remodelling. The Tip49 protein from Sulfolobus acidocaldarius was the focus of this work. Archaea of this species have only one copy of the tip49 gene while eukaryotes have two copies. The goal was to make a vector, using the Gibson assembly method, that contained the tip49 gene from S. acidocaldarius. Yeast strains that had lost rvb1, rvb2 or both genes were then supposed to be transformed with the vector to check if the gene from S. acidocaldarius could complement their gene loss. The possibility of expressing the wild type Tip49 protein as well as mutated versions Lemo21 (DE3) E. coli cells was tested, the protein was isolated and the ATPase activity measured. Even though four out of five yeast transformations were successful it seems that the tip49 gene from S.acidocaldarius does not complement their gene loss. It was possible to express the wild type Tip49 protein as well as mutated versions in Lemo21 (DE3) E.coli cells. The Tip49-WT and Tip49-K76A proteins were isolated but no ATPase activity was measured.

Samþykkt: 
  • 29.1.2021
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/37559


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
BS Ritgerð - Ísabella Ögn Þorsteinsdóttir.pdf3.44 MBOpinnHeildartextiPDFSkoða/Opna
yfirlysing.pdf584.5 kBLokaðurYfirlýsingPDF