is Íslenska en English

Lokaverkefni (Meistara)

Háskóli Íslands > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: https://hdl.handle.net/1946/40688

Titill: 
  • Titill er á ensku Autophagy and EVs in cancer cells. Effect of ATG8 knockdown on the biogenesis of CD81+ extracellular vesicles.
  • Tengsl sjálfsáts og utanfrumubóla (EVs) í krabbameinsfrumum.
Námsstig: 
  • Meistara
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    Dysregulation of both the autophagy pathway and the biogenesis of extracellular vesicles (EVs) in cells is involved in cancer development. Evidence is now emerging that these pathways may somehow be interlinked via ATG proteins. Further elucidation of the relationship between these pathways will lead to increased understanding of the intricacies of the cancer progression and possibly lead to the discovery of new chemotherapeutics or improved early detection of cancer.
    Thus, this study aimed to investigate EV secretion in cancer cells with or without autophagy disruption and determine if ATG8 gene knockout, or knockout of its sub-families LC3 and GABARAP, impacts the number and size of EVs. The sub-objective was to positively identify EVs as the isolated particles by examining protein markers specific to EVs and imaging the vesicles with electron microscopy. HeLa cancer cell lines were used with or without gene disruption of the six ATG8s, the three LC3s, and the three GABARAP genes. EVs from the cell lines' conditioned medium were immunocaptured with CD81 Fab-Strep. After isolation, the particles were analyzed with NanoSight for particle concentration and size, immunoblotted for protein markers with SW and imaged with TEM.
    This study determined that the EV secretion from ATG8 hexa-KO cell lines was significantly reduced. First data from the TKO cell lines indicate that EV secretion is also decreased in those. The identification of EVs with EV-specific protein markers was not completed successfully. However, electron microscopy images and analysis of numbers of particles with NTA indicate the positive isolation of EVs, but this cannot be asserted. Understanding the function of autophagy and EVs in health and illness is a worthy research topic that requires further exploration of these mechanisms and their relationship.

  • Truflun á bæði sjálfsátsferlinu og lífmyndun utanfrumubóla (EVs) í frumum hefur áhrif á þróun krabbameins. Vísbendingar eru um að þessir ferlar gætu tengst í gegnum ATG prótein. Frekari útskýring á tengslum þessara ferla mun leiða til aukins skilnings á framvindu krabbameina auk þess að leiða hugsanlega til uppgötvunar á nýjum krabbameinslyfjum eða bættrar snemmgreiningar krabbameins.
    Í þessari rannsókn var EV seyting í krabbameinsfrumum skoðuð með eða án truflunar á sjálfsátsferlinu og ákvarðað hvort ATG8 genaútsláttur, eða útsláttur af undirfjölskyldum þess LC3 og GABARAP, hefði áhrif á fjölda og stærð EVs. Undirmarkmið var að staðfesta að einangruðu agnirnar væru EVs með því að skoða hvort ákveðin prótein sem eru einkennandi fyrir EVs væru til staðar og mynda agnirnar með rafeindasmásjá. HeLa krabbameinsfrumulínur með eða án genaútsætti á ATG8, LC3 og GABARAP voru skoðaðar. EVs í frumuætinu voru einangraðar með CD81 Fab-Strep mótefnavaka. Eftir einangrun voru agnirnar greindar með NanoSight til að fá upplýsingar um fjölda agna og stærð þeirra, próteinmerki greind með SW og þær síðan myndaðar með rafeindasmásjá.
    Samkvæmt niðurstöðum þessarar rannsóknar minnkaði EV seyting hjá ATG8 hexa-KO frumulínum verulega. Ekki tókst að bera kennsl á EV með EV-sértækum próteinum. Hins vegar gefa rafeindasmásjármyndir og greining á fjölda agna með NTA til kynna jákvæða einangrun á EVs en ekki er hægt að fullyrða um það. Skilningur á virkni sjálfsáts og EVs í eðlilegu ástandi og sjúkdómum er verðugt rannsóknarefni en þörf er á frekari athugunum á þessum ferlum og tengslum þeirra.

Samþykkt: 
  • 27.4.2022
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/40688


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
MS_thesis_Ingibjorg_S_Sigurbjornsdottir.pdf3.99 MBLokaður til...01.07.2027HeildartextiPDF
Yfirlysing_Ingibjorg_S_Sigurbjornsdottir.pdf41.78 kBLokaðurYfirlýsingPDF