Mapping the Intracellular Distribution of Smoothened in the Primary Cilia

Abstract

Hedgehog (HH) boðferillinn, skiptir sköpum fyrir þroskun fósturvísa og við uppbyggingu vefjajafnvægis (e. tissue homeostasis). Sama ferli tengist einnig sjúkdómum eins og slitgigt (e. osteoarthritis) sem hefur áhrif á lífsgæði einstaklinga. Núverandi meðferðir við slitgigt einblína á einkenni frekar en að takast á við orsakir sjúkdómsins. Þar skortir því enn á lausnir á sviði lækninga sem og lyfja. Í kjarna HH ferilsins er Smoothened próteinið (SMO), sem hefur það hlutverk að flytja merki frá frumuhimnu til kjarna, sem hvetur áfram genatjáningu og frumuferli. Amínósýrubreyting í systeinríkahneppi (CRD) SMO próteinsins (SMOR173C) hefur verið tengd við slitgigt. Hins vegar eru sameindaferlarnir sem leiða til sjúkdómsins enn óljósir. Með notkun smásjármyndgreiningar, með áherslu á staðsetningu SMO próteina, má öðlast innsýn í virkni þeirra, þátttöku í HH ferlinu og tengsl við slitgigt. Í ritgerðinni er leitast við að öðlast þekkingu á þessu ferli. Með mótefnalitun og plasmíðleiðslu reyndist auðvelt að finna staðsetningu frumbifhársins. Með frumbifhárið vel sýnilegt var hægt að hefja SMO plasmíðleiðslu og síðan virkjun á HH ferlinu. Plasmíðleiðslan og virkjunin heppnuðust þó ekki. Þrátt fyrir árangurslausar tilraunir til að sjá SMO afbrigðin í NIH3T3 frumum náðist þó árangur við uppsetningu á staðlaðri aðferðarlýsingu. Þrátt fyrir áskoranir í lokakafla tilraunarinnar má færa rök fyrir því að aukinn árangur hefði náðst ef tími hefði unnist til að gera breytingar í samræmi við þessa aðferðafræði og með fleiri endurtekningum.