is Íslenska en English

Lokaverkefni (Meistara)

Háskóli Íslands > Heilbrigðisvísindasvið > Meistaraprófsritgerðir - Heilbrigðisvísindasvið >

Vinsamlegast notið þetta auðkenni þegar þið vitnið til verksins eða tengið í það: https://hdl.handle.net/1946/48304

Titill: 
  • Titill er á ensku Analysis of cytokine response following vaccination against equine insect bite hypersensitivity
  • Greining á boðefnasvari hrossa í kjölfar bólusetningar gegn sumarexemi
Námsstig: 
  • Meistara
Útdráttur: 
  • Útdráttur er á ensku

    Insect bite hypersensitivity (IBH) in horses is an IgE-mediated allergy caused by allergens of biting midges (Culicoides spp.). Horses in Iceland do not suffer from IBH due to the absence of the causative midges. However, when exported to infested areas, they develop IBH at significantly higher rates than local horses. IBH has a significant impact on the horse’s wellbeing and is a major welfare issue.
    The general aim of the IBH project is to develop prophylactic and therapeutic allergen-specific immunotherapy against IBH. For this it is crucial to have well-defined pure allergens and reliable tests to analyze the immune response. The specific aim was to optimize the production and purification of a major allergen (Cul o 5) for use in vaccinations and to establish an effective method to evaluate the cytokine response post-vaccination. Production of Cul o 5 in E. coli in Cinnabar medium and removal of lipopolysaccharide was unsuccessful. Using 2xYT medium, increased protein yield was obtained by altering the production. The purified protein was shown to be stable after lowering the imidazole to 50 mM. PBMCs of allergen boosted horses were re-stimulated in vitro for cytokine measurements by qPCR and bead-based multiplex assay. Primers, probes and parameters of the qPCR were optimized. Due to great difference between the horses, this approach was not tried further. Stimulation of 800,000 cells for 96 hours initially suggested the best condition using the bead-based assay. Subsequent tests on fourteen horses indicated that stimulating for 48 hours is more suitable, as it consistently showed significant differences in cytokine levels before and after boost. The production of problematic major allergens can be improved by altering the production condition. For analyzing the cytokine response following vaccination, the 48 and 96 hours stimulation of 800,000 cells will be repeated in the next IBH vaccination experiments to confirm the optimal time point.

  • Sumarexem (SE) í hestum er IgE-miðlað ofnæmi gegn ofnæmisvökum úr munnvatnskirtlum smámýs (Culicoides spp.). Smámýið lifir ekki á Íslandi og því fá hestar hérlendis ekki SE. Íslenskir hestar sem eru fluttir út á flugusvæði eru mun líklegri til að fá SE heldur en hestar sem fæddir eru á flugusvæði. SE veldur hestunum vanlíðan og er verulegt dýravelferðarmál. Meginmarkmið SE rannsókna er að þróa ofnæmisvakasértæka meðferð, bæði fyrirbyggjandi og læknandi. Því er nauðsynlegt að hafa vel skilgreinda ofnæmisvaka ásamt áreiðanlegum prófum til þess að meta ónæmissvarið. Aðal markmiðið hér var að staðla framleiðslu og hreinsun á aðal ofnæmisvaka (Cul o 5) fyrir notkun í bólusetningu. Framleiðsla Cul o 5 í E. coli í Cinnabar æti og fjarlæging fitufjölsykra bar ekki árangur. Breyting á skrefum í framleiðslu Cul o 5 í 2xYT æti leiddi til hærri styrks á hreinsuðu próteini. Hreinsaða próteinið var stöðugt í 50 mM imidazole. Tveir hestar voru endurbólusettir og hvítfrumur þeirra örvaðar in vitro til þess að mæla boðefnasvar með qPCR og fjölkúlnaaðferð. Vísar, þreifarar og aðrir þættir qPCR voru staðlaðir. Mikill einstaklingsmunur var á milli hestanna og var qPCR ekki prófað frekar. Örvun á 800,000 frumum í 96 tíma sýndi upphaflega bestu niðurstöðurnar með fjölkúlnaaðferð. Boðefnamæling á fjórtán hestum benti hins vegar til þess að örvun í 48 tíma væri hentugri, þar sem að hún sýndi oftar marktækan mun á boðefnasvari fyrir og eftir endurbólusetningu. Hægt er að bæta framleiðslu á aðal ofnæmisvökum með því að breyta aðstæðum framleiðslunnar. Í næstu SE bólusetningatilraunum verða 800,000 frumur örvaðar í 48 og 96 tíma til að sannreyna enn frekar hvor tíminn er betri til að greina boðefnasvar eftir bólusetningu.

Samþykkt: 
  • 28.6.2024
URI: 
  • http://hdl.handle.net/1946/48304


Skrár
Skráarnafn Stærð AðgangurLýsingSkráartegund 
MSritgerð- Hafdís María Pétursdóttir.pdf4,53 MBOpinnHeildartextiPDFSkoða/Opna
Skemman_yfirlysing.pdf421,72 kBLokaðurYfirlýsingPDF