Transformation and expression of AQUI Thermostable subtilising-like serine protease

Abstract

Aqualysin I (AQUI) is a thermostable serine protease that is crucial for industrial and biotechnological applications, especially due to its ability to maintain activity at high temperatures. This study focused on the overexpression and analysis of Aqualysin I, utilizing various techniques to evaluate expression. The AQUI wild type and the S280_ variant were introduced into bacterial cells, with expression induced under different controlled conditions. Protein presence was assessed using SDS-PAGE and spectroscopic techniques. It was challenging to capture a suitable expression, so the project was slightly adjusted, and an effort was made to address the mystery. Bands, from the SDS-PAGE gels, indicating protease activity appeared after heat treatment at 70°C, suggesting aqualysin activity; however, the overall yield was low, which made it inadequate for purification or detailed enzymatic assays. These results indicate that while some expression was achieved, further optimization is essential to improve yields. Although the results were limited, the experiment emphasizes key aspects of protein expression and lays the groundwork for future methodological advancements.

Aqualysin I (AQUI) er hitastöðugur serínpróteasi sem er mikilvægur fyrir iðnaðar- og líftæknilega notkun, sérstaklega vegna getu þess að viðhalda virkni við há hitastig. Þessi rannsókn einbeittist að tjá og greina Aqualysin I framleiðslu með því að nota ýmsar aðferðir til að meta tjáningu próteinsins. Notast var við AQUI villigerð og AQUI S280_ afbrigði sem voru tjáð við margar mismunandi aðstæður. Tilvist próteinsins var metin með SDS-PAGE og litrófsgreininga aðferðum. Krefjandi var að ná tjáningu, svo verkefnið var aðlagað og reynt var að leysa ráðgátuna hvers vegna það var krefjandi. Bönd frá SDS-PAGE gelunum bentu til þess að virkni próteinsins kæmi fram eftir hitameðferð við 70°C, sem skein ljósi á mögulega virkt Aqualysin í sýnum; hins vegar voru heimtur það lágar að ekki var hægt að hreinsa próteinið og gera ítarlegri tilraunir. Niðurstöður benda til þess að þrátt fyrir lága tjáningu á próteininu, þarf að bæta hámarks heimturnar. Niðurstöður tilraunarinnar voru fremur takmarkaðar, en leggur þó mikilvægi á lykil þáttum sem eru við prótein tjáningar og leggur góðan grunn fyrir framtíðar aðferðafræðilegum framförum í tjáningu.